کلونینگ و بیان آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس در اشریشیاکلی
نویسندگان
چکیده مقاله:
Background and Objective: Uricase (EC 1.7.3.3) is an enzyme which catalyses uric acid to H2O2 and alantoin and is utilized in the treatment of hyperuricemia or gout. The aim of this study was cloning of Aspergillus flavus uricase synthetic gene into pET-28(a) and its recombinant expression in E. coli Materials and Methods: The coding sequence of uricase retrieved from gene bank and once optimized, the gene synthesis was ordered. Then, the synthetic gene subcloned between NcoI and XhoI within the vector. The proper subcloning was confirmed by enzymatic digestion check, PCR and finally DNA sequencing. The construct, then chemically transformed into E. coli BL21 and induced by IPTG which followed by overexpression optimization. For enzyme expression evaluation, protein gel electrophoresis was utilized. Results: Restriction check, PCR and sequencing indicated that the coding sequence of enzyme was cloned in the desired point of vector. The optimized condition obtained for enzyme expression was IPTG 1mM for 6 h at 22 °C. Enzyme molecular weight was determined 34.5 kDa by electrophoresis. Evaluation of uricase specific activity showed that the expressed enzyme is 7.69 U/mg and it is catalytically active. Conclusion: The results of the current research showed that the uricase gene could be simply cloned and expressed in pET system. Enzyme specific activity determination exhibited that the enzyme was produced as a soluble protein and catalytically active in E. coli cytosole.
منابع مشابه
کلونینگ و بیان آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس در اشریشیاکلی
زمینه و هدف: اوریکاز (ec 1.7.3.3) آنزیمی است که باعث کاتالیز اوریک اسید به h2o2 و الانتوئین می شود و در درمان نقرس استفاده می شود. هدف این تحقیق کلون سازی ژن سنتتیک کدکننده ی آنزیم اوریکاز آسپرژیلوس فلاوس در پلاسمید pet-28a(+) و بیان نوترکیب آن در اشریشیاکلی می باشد. روش بررسی: بعد از استخراج توالی ژنی از پایگاه داده ها، ژن کدکننده ی اوریکاز بهینه سازی شد و سنتز آن سفارش داده شد. سپس ژن سنتتیک ...
متن کاملمهندسی آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس با استفاده از روش جهشزایی هدفدار
Background & Aims: As a therapeutic enzyme, Aspergillus flavus (uricase or; EC 1.7.3.3), is used for treatment of urate deposits, gout and nephropathy, hyperuricemia and tumor lysis syndrom (TLS). Despite desirable kinetic features, fragile stability of uricase limits its wide range applications. Therefore, several approaches have developed such as protein engineering and genetic manipulations ...
متن کاملکلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD
Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...
متن کاملکلونینگ، بیان و بهینهسازی محیط جهت بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلیمورفا
سابقه و هدف: آنزیم فیتاز توانایی تبدیل فیتیکاسید به میواینوزیتول و فسفات معدنی را دارا میباشد؛ از اینرو به صورت گستردهای به عنوان یک افزودنی در غذای حیوانات تک معدهای اضافه میگردد. هدف این تحقیق، کلونینگ، بیان و بهینهسازی محیط برای بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلیمورفا بود. مواد و روشها: در این تحقیق، جهت دستیابی به مقادیر بالای تولید پروتئین، توالی ...
متن کاملکلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم CEL Iاندونوکلئاز از گیاه کرفس
اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گ...
متن کاملاثر اسانس آویشن شیرازی روی آسپرژیلوس فلاووس
مقدمه: قارچها از عوامل مهم فساد مواد غذایی و تولید ترکیبات سمی به نام مایکوتوکسینها هستند. عوارض جانبی ناشی از مصرف نگهدارندههای شیمیایی موجب متمرکز شدن تحقیقات روی استفاده از ترکیبات طبیعی به ویژه اسانسها جهت جلوگیری از رشد قارچها شده است. اسانسها ترکیبات طبیعی حاوی مخلوطی از اجزای ترپنیک بوده که دارای خواص ضدمیکروبی و آنتیاکسیدانی هستند. آویشن شیرازی یک گیاه بومی ایران بوده که اثرات مخ...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 24 شماره 106
صفحات 109- 121
تاریخ انتشار 2016-07
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023